蝙蝠宿主中新病毒发现及蝙蝠冠状病毒HKU9受体的探索

中文摘要 7-9
Abstract 9-11
缩略词表 12-14
引言 14-16
第一部分 研究内容 16-90
    第一章 果蝠冠状病毒GCCDC1鉴定及其特征性p10基因的起源和功能研究 18-58
        1.1 材料和方法 20-34
            1.1.1 实验材料 20-23
            1.1.2 实验方法 23-34
        1.2 结果 34-53
            1.2.1 蝙蝠样本检测 34
            1.2.2 细胞培养与病毒分离 34
            1.2.3 病毒命名及全基因组测序 34-35
            1.2.4 病毒全基因组分析 35-41
            1.2.5 进化分析 41-44
            1.2.6 呼肠孤病毒p10基因重组到Ro-BatCoV GCCDC1基因组中的证据 44-47
            1.2.7 Ro-BatCoV GCCDC1亚基因组结构 47-49
            1.2.8 p10基因是一个功能基因 49-53
        1.3 讨论 53-58
    第二章 蝙蝠冠状病毒HKU9 spike蛋白推测的受体结合结构域:Beta冠状病毒受体结合基序的进化 58-80
        2.1 材料和方法 60-66
            2.1.1 实验材料 60-61
            2.1.2 主要实验仪器 61-62
            2.1.3 实验方法 62-66
        2.2 结果 66-77
            2.2.1 HKU9-RBD的表达与纯化 66-67
            2.2.2 HKU9 Spike蛋白结构特征及HKU9-RBD序列特点 67-68
            2.2.3 HKU9-RBD与SARS-CoV及MERS-CoV受体的结合情况 68-71
            2.2.4 HKU9-RBD晶体生长条件 71
            2.2.5 重原子结合试验 71
            2.2.6 HKU9-RBD晶体结构 71-73
            2.2.7 Beta冠状病毒中RBD核心亚结构域的结构保守性 73-74
            2.2.8 同源相互作用模式将外部亚结构域锚定在核心亚结构域上 74-77
        2.3 讨论 77-80
    第三章 云南省墨江哈尼族自治县废弃矿洞中不明原因重症肺炎事件病原学初步调查 80-90
        3.1 材料和方法 81-83
            3.1.1 试剂和材料 81
            3.1.2 样本采集 81
            3.1.3 样本处理 81
            3.1.4 核酸提取 81-82
            3.1.5 引物设计 82-83
            3.1.6 样本检测 83
            3.1.7 序列同源与进化分析 83
        3.2 结果 83-87
            3.2.1 样本检测 83-85
            3.2.2 序列同源与进化分析 85-87
        3.3 讨论 87-90
第二部分 文献综述 90-126
    第四章 新发动物源性病原及其对人类的致病性 92-104
        第一节 新发传染病概念及分类 92
        第二节 近30年来出现的新发传染病 92-95
        第三节 新发传染病频发的生态和环境因素 95-99
        第四节 野生动物在新发传染病跨物种传播中的作用 99-104
    第五章 蝙蝠与新发传染病 104-114
        第一节 流感和冠状病毒的跨物种传播 104-105
        第二节 蝙蝠的生物学和生态学特性 105-109
        第三节 蝙蝠体内携带的重要病原 109-111
        第四节 蝙蝠在疾病根除计划中的作用 111-114
    第六章 新病毒发现技术 114-126
        第一节 病毒发现的传统方法和技术 114-116
        第二节 新病毒发现的分子生物学技术 116-124
            简并引物PCR检测技术 117-120
            差减杂交技术 120-121
            DNA酶处理-序列非依赖性单引物扩增技术(DNase-SISPA) 121-122
            以cDNA扩增片段长度多态性为基础的病毒发现(VIDISCA) 122-124
        第三节 宏基因组学和新一代测序技术 124-126
参考文献 126-142
全文总结 142-144
文章发表 144-145
致谢 145-147